р восстановление

1. Выньте замороженную пробирку из жидкого азота и сразу же поставьте на водяную баню при 37℃, слегка встряхивая. После того, как жидкость растает (примерно 1-1,5 минуты), достаньте немного спирта и поставьте его на сверхчистый рабочий стол.

2. Перенесите клеточную суспензию в центрифужную пробирку объемом 15 мл с 10 мл среды (промойте замороженную пробирку средой и отмойте все прилипшие к стенке клетки) и отцентрифугируйте при 1000 об/мин в течение 5 минут.

3. Супернатант переворачивали и добавляли 1 мл среды для суспендирования клеток. Коптите в чашку диаметром 10 см с 10 мл среды и осторожно встряхивайте влево и вправо, чтобы равномерно распределить клетки в чашке.

4. Отметьте тип клетки и дату, имя человека и т. д., поместите ее в инкубатор СО2, приклейте клетки и смените среду.

5. Среду меняли один раз в 3 дня.

п ассаж

1. Растения пассировали до достижения 80-90% покрытия.

2. На исходном носителе .

3. Добавьте соответствующий трипсин (просто покройте клетки) и проварите в течение 1-2 минут. .

4. Пищеварение останавливали добавлением равного объема сывороточной среды. .

5. Взорвите клетки пипеткой и оставьте их в подвешенном состоянии.

6. Клетки аспирировали в центрифужную пробирку на 15 мл и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин.

7. Вылейте супернатант и добавьте 1-2 мл среды, чтобы взорвать все клетки.

8. Клетки переносили в несколько культуральных чашек в зависимости от вида клеток. Как правило, раковые клетки делятся на 5 клеток и передаются три нормальные клетки. Продолжайте культивировать.

Свободно переваривать клетки и центрифугировать их (там же выше).

Суспензируйте клетки с помощью соответствующего замороженного раствора для хранения, разделите их на стерилизованные пробирки для заморозки, оставьте на несколько минут и укажите тип клеток и дату хранения в замороженном состоянии. затем хранят в перфузии жидким азотом.

Приготовление раствора для криоконсервации: 70% среда 20% ФБС 10% ДМСО. ДМСО следует добавлять медленно и непрерывно встряхивать.