В качестве вспомогательного материала в экспериментах по обнаружению методом ИФА фермент тарелка играет решающую роль и непосредственно влияет на окончательные результаты эксперимента. Качество Ферментная пластина в основном зависит от его чувствительности к адсорбции белка, разницы в емкости адсорбции белка между пластинами и отверстиями, а также от разницы между партиями закупленного ферментная пластина . Следовательно, выбор ферментная пластина продукт с высокой чувствительностью к адсорбции белка, небольшая разница между отверстиями емкости адсорбции белка и небольшая разница между партиями являются гарантией получения экспериментатором надежных и стабильных экспериментальных результатов.

Ферментная пластина классификация: согласно различным стандартам классификации, тарелка имеет различные классификации.

1: По количеству отверстий его можно разделить на 96 отверстий, 48 отверстий и т. д. Поскольку ферментная пластина в основном используется с устройством для считывания микропланшетов, тарелка метр на рынке имеет не более 96 отверстий, поэтому микропланшет имеет 96 отверстий.

2: В зависимости от различных днищ, они делятся на плоское дно, U-образное дно, V-образное дно и т. Д.

Показатель преломления плоского основания низкий, что подходит для обнаружения в микропланшете;

Т Показатель преломления микропланшета U высок, удобен для отбора проб, отбора проб и смешивания, и позволяет непосредственно наблюдать за изменением цвета, не помещая его на микропланшет, чтобы определить, существует ли соответствующая иммунная реакция.

Микропланшет с основанием V может точно абсорбировать образец.

3: В соответствии с различной связывающей способностью микропланшета, белка и других молекул они делятся на высокую силу связывания, среднюю силу связывания и аминирование.

(1) Высокая связующая сила

После поверхности этого микропланшета его способность связывания белка значительно повышается, до 300~400 нг IgG/см2, а молекулярная масса основного связанного белка составляет> 10 кД. Использование этого класса микропланшетов может улучшить чувствительность и относительно снизить концентрацию и количество белка с покрытием, что облегчает проведение неспецифических реакций. После покрытия антигеном или антителом неионогенный детергент не может эффективно запечатать место несвязанного белка, и белок следует использовать в качестве герметика.

(2) Средняя связующая сила

Такие планшеты для микропланшетов пассивно связываются с белком за счет гидрофобных связей на поверхности и подходят в качестве твердофазных носителей для макромолекулярных белков с молекулярной массой >20 кДа, с емкостью связывания белка от 200 до 300 нг IgG/см2. Из-за особенностей его связывания только с макромолекулами он подходит для твердофазных носителей в качестве неочищенных антител или антигенов для снижения вероятности неспецифической перекрестной реактивности. Пластина может представлять собой инертный белок или неионогенный детергент в качестве герметизирующего раствора.

(3) Аминирование

Этот микропланшет после модификации поверхности имеет положительно заряженную аминогруппу, гидрофобная связь которой заменена на гидрофильную. Этот класс микропланшетов подходит в качестве твердофазного носителя для низкомолекулярных белков. При использовании подходящего буфера и pH поверхность связывается с отрицательно заряженными небольшими молекулами посредством ионных связей. Благодаря гидрофильным свойствам его поверхности и способности ковалентно связываться с другими сшивающими агентами его можно использовать для фиксации белковых молекул, растворимых в обеззараживающих агентах, таких как Тритон-100, Твин 20 и др. Недостатком этой пластины является из-за пониженной гидрофобности; кроме того, поверхность должна быть эффективно закрыта. Из-за гидрофильных и ковалентных свойств поверхности используемый герметизирующий раствор должен быть способен взаимодействовать с любой функциональной группой в нереакционноспособной аминогруппе и с выбранным сшивающим агентом.

4. По цвету можно разделить на прозрачные, черные и белые.

Прозрачный наиболее часто используется для наиболее общих экспериментов по ферментной иммунизации. В отличие от прозрачных микропланшетов, существуют также непрозрачные микропланшеты для светового обнаружения, обычно черно-белые. Сам черный микропланшет обладает светопоглощением, поэтому его сигнал намного ниже, чем у белого микропланшета, поэтому его обычно используют для обнаружения сильного света, например, для обнаружения флуоресценции. Белый микропланшет используется для обнаружения слабого света, часто используется для общей хемилюминесценции. Кроме того, черный микропланшет также может ослабить проблему неспецифических реакций. В то же время важно отметить, что с обычным микропланшетом невозможно люминесцентное обнаружение, потому что свет, излучаемый в результате хемилюминесцентной реакции, изотропен, если с прозрачным микропланшетом свет будет распространяться не только от вертикального направления, но также и в горизонтальном направлении, легко пропускайте свет через зазор между отверстием и стенкой отверстия, в результате чего на свет от значения светопоглощения отверстия влияет свет, излучаемый соседним отверстием.

Хороший микропланшет должен обладать хорошими адсорбционными характеристиками, низким пустым значением, высокой прозрачностью дна отверстий и одинаковыми характеристиками между планшетами и между отверстиями одного и того же планшета. Из-за различий в сырье и различиях в производственном процессе качество различных продуктов сильно различается, поэтому производительность каждой партии микропланшетов необходимо проверять заранее перед использованием. Обычно используемые методы проверки включают определенную концентрацию человеческого IgG (обычно 10 нг/мл), покрытую лунками планшета ELISA, после промывки, добавление соответствующего разведения меченого ферментом антитела против человеческого IgG в каждую лунку, промывку после сохранения тепла, добавляя краситель субстрата, останавливают ферментативную реакцию и измеряют оптическую плотность раствора в каждой лунке соответственно. Условия реакции контролировали таким образом, чтобы показание каждой лунки поддерживалось на уровне поглощения около 0,8. Рассчитывали среднее значение всех показаний. Разница между средним значением всех отдельных показаний и всеми показаниями должна быть менее 10 %. Следующие три микропланшета - это A, B и C в качестве примера.

Прямой метод: определение адсорбции IgG человека на поверхности микропланшета.

Сэндвич-метод с двойными антителами: антиген в сыворотке положительный на античеловеческие антитела.

Как видно из приведенного выше рисунка, в этих трех типах биоферментных планшетов микропланшет класса А обладает лучшим эффектом адсорбции белка, но также улучшает чувствительность адсорбции белка, что может обеспечить более надежные экспериментальные данные. Кроме того, вы можете спросить о табличке разницы партии. Ниже приведена разница в партии определенной пластины. Как видно из диаграммы данных различий внутри партии, микропланшет имеет хорошую стабильность между партиями, а разница коэффициента вариации внутри партии (CV) составляет около 5,0%, что значительно ниже, чем коэффициент вариации внутри партии. ниже 10,0% в стандарте контроля качества клинической иммунной реакции. Следовательно, он также подходит для экспериментов ELISA.