Настольная низкоскоростная замораживающая центрифуга используется в лаборатории для первичного разделения и экстракции биологических макромолекул, осадков и т. д. Ее поворотная головка в основном изготовлена ​​из алюминиевого сплава, которая бывает плоской и угловой. Центробежная трубка изготовлена ​​из твердого стекла, полиэтилена, твердого пластика и трубки из нержавеющей стали. Центрифуга оснащена приводным двигателем, таймером, регулятором (индикатором скорости) и системой охлаждения (регулируемый диапазон температур - 20~40 ℃), которая может заменить вращающиеся головки с различной производительностью и различными типами скорости вращения в зависимости от к потребностям центробежного материала.

Подробные этапы центрифугирования для выделения цитоплазматических и ядерных белков с помощью настольной центрифуги с низкой скоростью замораживания:

1. Определите состояние роста клеток. Состояние роста клеток должно быть 80% или выше:

2. Центрифуга при 1500 об/мин в течение 5 мин.

3. Удалите супернатант, промойте клетки равным объемом холодного PBS и повторите 3 раза, как на шаге 2.

4. В соответствии с предполагаемым количеством осадков добавьте 5-кратный объем изотонического сисбуфера к частицам клеток, чтобы клетки аккуратно взвесились и по возможности избегали образования пены.

5. Добавьте лизирующий буфер в суспендированные клетки и поместите его на лед на 15 минут, чтобы клетки расширились, что можно проверить под микроскопом.

6. Для увеличенных клеток в клеточном эксперименте добавьте 10% IGEPALCA-630, чтобы конечная концентрация достигла 0,3%, хорошо перемешайте и осторожно добавьте

7. Немедленно центрифугируйте (для больших количеств используйте пробирку 1,5 мл при 5500 об/мин в течение 30 с; для больших количеств используйте пробирку 50 мл при 5500 об/мин в течение 2 мин).

8. Перенесите супернатант (цитоплазматический белок) в новую пробирку для замораживания.

9. Суспендируйте клетки с 5-кратным объемом взвешенных частиц в изотоническом буфере и хорошо перемешайте.

10. Центрифугируйте клеточную суспензию при 1500 об/мин в течение 5 минут и удалите супернатант.

11. Суспендируйте частицы с 2/3-кратным объемом экстракционного буфера.

12. Поместите пробирку на вибромешалку, встряхните и перемешайте со скоростью 700 об/мин в течение 15 минут, а затем со скоростью 1400 об/мин в течение 15 минут. Весь процесс должен быть осторожным, чтобы избежать пены

13. Центрифугируйте при 9400 об/мин в течение 15 минут, перенесите супернатант в новую замороженную центрифужную пробирку после центрифугирования при низкой температуре.

14. Разделите на несколько частей и заморозьте их жидким азотом и храните (длительное хранение должно быть при -80 ℃, кратковременное хранение должно быть при - 20 ℃)