Вообще говоря, из-за сложного состава крови многие вещества, особенно плазма или сыворотка высших животных, оказывают сильное интерференционное действие на реакцию между реагентом ТАЛ (ЛАЛ) и эндотоксином. Поэтому, когда мы тестируем эндотоксин таких образцов, мы должны удалить мешающие вещества перед тестированием.

В настоящее время интерферирующие вещества в плазме в основном включают различные ингибиторы протеаз, эндотоксин-связывающие белки и ингибиторы плазминогена. Для колориметрии фактор Ха может разлагать пептидную цепь Boc-LEU-Gly-Arg-PNA. Поэтому необходимо исключить эти мешающие вещества перед определением.

Методы предварительной обработки для удаления мешающих веществ в крови следующие:

(1) Метод нагрева разбавления: плазма разбавляется в 3-10 раз растворенной водой, а затем нагревается в воде с температурой 37-100 ℃. Время выдержки обычно составляет 5-10 минут;

(2) Метод экстракции хлороформом: добавить в плазму такое же количество хлороформа и вибрировать в течение 3 часов, затем взять верхний слой для обнаружения;

(3) Метод обработки эфиром: добавить эфир в плазму для обработки и удалить эфир при 40 ℃;

(4) Метод трифторуксусной кислоты: добавьте уксусную кислоту в плазму, чтобы довести pH до 4,0, а затем используйте K2HPO4, чтобы довести pH до 7–7,5;

(5) Метод обработки поверхностно-активным веществом: как и метод нагрева разбавления, только разбавляющая вода заменяется поверхностно-активным веществом;

(6) Гель-фильтрация;

(7) Метод щелочной обработки: плазму выдерживали при 0,2NNaOH 37 ℃ в течение 10 минут, а затем нейтрализовали HCl;

(8) Метод хлорной кислоты (PCA) или новый метод хлорной кислоты (New PCA);

(9) Метод шариков: поместите в плазму специальную смолу, поглощающую эндотоксин, выньте ее и добавьте реагент LAL для реакции.

Среди этих методов обычно используются метод экстракции хлороформом, метод нагревания разбавления, метод хлорной кислоты (PCA) и метод новой хлорной кислоты (New PCA). Первые два метода необходимо обсудить во время определения из-за наличия скорости восстановления эндотоксина, ложных срабатываний и других проблем. Метод PCA (Новый метод PCA) благодаря хорошей степени извлечения добавленного эндотоксина в настоящее время в основном используется в доклиническом лечении в Японии.